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掌握PeproTech細(xì)胞因子溶解稀釋方法的重要性
2020-05-05 瀏覽次數(shù)：3656
一、查看說(shuō)明書(shū)
二、溶解
1. 離心
細(xì)胞因子為凍干粉，開(kāi)蓋*00-12000rpm離心30s。
2. 溶解
根據(jù)說(shuō)明書(shū)紅色標(biāo)識(shí)地方的描述，選擇合適的溶解液，溶解到后邊的濃度范圍內(nèi)。如此可以確保蛋白充分溶解復(fù)性，保證產(chǎn)品質(zhì)量。請(qǐng)不要使用非建議溶液溶解。
目的：使細(xì)胞因子從無(wú)活性的凍干粉狀態(tài)充分溶解復(fù)性成為有活性的蛋白溶液。
注意：不要用渦旋振蕩儀劇烈渦旋，可以用槍頭輕輕吹打幾次助溶。有的細(xì)胞因子溶解比較慢，需要在室溫靜置或者搖床低速搖一段時(shí)間使充分溶解。
3.短期儲(chǔ)存
溶解后的蛋白溶液可以在2-8度儲(chǔ)存1周。
4.長(zhǎng)期儲(chǔ)存
如果您的實(shí)驗(yàn)，一周內(nèi)不能用完。必須將第2步中獲得的溶液用含載體蛋白的溶液進(jìn)一步稀釋。(詳見(jiàn)：三、稀釋)
目的：對(duì)溶解的蛋白溶液進(jìn)行稀釋凍存。加入載體蛋白可以封閉掉管壁上的蛋白結(jié)合位點(diǎn)，且可以在低溫下維持細(xì)胞因子的穩(wěn)定。
三、稀 釋
1. 配制
配制0.1%BSA或者10%FBS或者5%海藻糖的稀釋液備用（確保無(wú)菌），這三種稀釋液的配制的Buffer可以用PBS或者細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基。使用以上三種稀釋液的任意一種稀釋重懸的蛋白溶液，稀釋濃度根據(jù)您的使用濃度確定，不要低于10ug/ml。即可分裝成小管，凍存在-20—-80度。
2.使用方法
使用時(shí)取用一支凍存的細(xì)胞因子，加入到您的培養(yǎng)基中至使用濃度。細(xì)胞因子應(yīng)避免反復(fù)凍融。
四、FAQ
1：為什么會(huì)有這么多種溶解方法？
A：蛋白的溶解性與很多因素有關(guān)，其中比較重要的是pH值和離子強(qiáng)度。PeproTech的細(xì)胞因子或重組蛋白在出廠前均經(jīng)嚴(yán)格測(cè)試，說(shuō)明書(shū)上所標(biāo)明的溶解液是能夠?qū)⒃摷?xì)胞因子或重組蛋白*溶解的液體。如果您所用的溶解液的pH值和離子強(qiáng)度與說(shuō)明書(shū)中所標(biāo)明的不符，很多時(shí)候會(huì)造成細(xì)胞因子或重組蛋白不能*溶解或者根本無(wú)法溶解，這樣所配得的細(xì)胞因子或重組蛋白必然活性不夠或喪失。
2：高于或低于該濃度范圍會(huì)有什么問(wèn)題呢？
A：首先，細(xì)胞因子或蛋白會(huì)不穩(wěn)定，即很容易出現(xiàn)活性下降的現(xiàn)象。其次，高于這個(gè)濃度范圍，可能會(huì)超過(guò)該蛋白的大溶解濃度，即蛋白無(wú)法*溶解。再者，高于或低于該濃度范圍，蛋白可能會(huì)出現(xiàn)聚集(aggregation)，終結(jié)果還是部分蛋白未溶解，導(dǎo)致蛋白活性的減弱。
3：若想保證溶解液與凍干粉充分混勻，以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞因子或重組蛋白的*溶解，該怎么辦呢？
A：多數(shù)細(xì)胞因子或重組蛋白的凍干粉是非常容易溶解的，一般我們用移液槍的槍頭輕吹幾下，即可使細(xì)胞因子或重組蛋白*溶解。對(duì)于不易溶解的細(xì)胞因子或蛋白，PeproTech會(huì)在說(shuō)明書(shū)中進(jìn)行備注(Note)
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